Serological And Immunologcal Studies On Escherichia Coli:

Shaimaa Sayed Bdel-halim Sayed Ahmed Amer

بكتريا الايشريشيا كولاى تتبع العائله Enterobacteriacea و تعيش فى جسم الانسان وبعض الحيوانات و لكنها فى بعض الاوقات قد تكون ممرضه. و تستخدم بكتريا الايشريشيا كولاى فى الكشف عن وجود تلوث الماء و تتميز بكتريا الايشريشيا كولاى انها سالبة الجرام ,هوائيه ولا هوائيه تتحرك باستخدام الاسواط و لا تكون سبورز .تجمع عينات من ثلاث اماكن وهى شبين الكوم و منوف والباجور من على بعد 20 متر من الشاطىء و على عمق 50 سم تحت سطح الماء فى حاويات زجاجيه خاصه نظيفه على حسب الاختبارات التى ستجرى لها و تشمل .1-الاختبارات فيزيائيه – كيميائيه و تشمل درجه الحراره, ودرجة الحموضه, درجة التوصيل الكهربائى, الانيونات و الكاتيونات الموجوده ف المعادن وتحددي المعادن الموجوده , الاكسجين المذاب يتم تحديد نسبة وجودها فى كل عينه من المجمعه من الاماكن الثلاثه .2-الاختبارات البيولوجيه :- بعد جمع العينات يجرى لها SPC technique لتقدير عدد البكتريا الحيه الموجوده فى عينه الماء وذلك باستخدام بيئه مكونه منTryptone; 5.0mg/lYeast extract; 2.5 mg/lGlucose; 1.0 mg/lAgar; 15.0 mg/lDistilled water 1.0 liter.عند درجة حراره 35°سيليزيه و لمدة 24 ساعه. ويتم بعدها حساب كل من Total coliform count بإستخدام M-Endo Agar LES medium عند درجة حراره 35°سيليزيه لمدة 24 ساعه , وحساب Fecal coliform فى بيئه M-Endo agar عند رجة حراره 44° سيليزيه و لمدة 24 ساعه و حساب Fecal streptococci بإستخدام M-Enterococcus medium عند رجة حراره 35°سيليزيه و لمدة 48 ساعه .و بعد ذلك يتم تحدديد البكتريا الايشريشيا كولاى و زراعتها باستخدام MUG medium و عند درجة حراره44.5° سيليزيه تظهر نتيجه ايجابيه للبكتريا بخروج غاز Co2 وبعد ذلك تزرع على MacConkey لاختبار تخمر السكريات. وبعد الحصول على بكتريا الايشريشيا كولاى يجرى لها الاختبارات الاتيه :- تفاعل الجرام , تكوين الspores , تكوين الكبسولات , اختبار الحركه, اختبارات الاكسده والاختزال , اختبار للكشف عن انزيم اليوريز , تخمر السكريات , تحلل النشا , اسالة الجيلاتين و تكوين الاندول و اختبار الميثيل الاحمر.تستخدم البكتريا كامله ومكسره لانتاج اجسام مضاده عن طريق خلطها مع Freund’s complete adjuvant و حقنها للارانب عن طريق الحقن الوريدى والعضلى و بعد ذلك يتم جمع الدم و يستخدم الطرد المركزى لاخذ المصل المضاد . يفصل IgG بإستخدام كبريتات الامونيوم المشبعه وربط IgG بإنزيم Alkaline phosphatase لانتاج الكاشف Kit لاستخدامه فى الكشف عن بكتريا الايشريشيا كولاى معمليا.و عمليا تم تقيم Kit باستخدام Tube precipetine test واعطى نتائج 1:12048, 1:1024 .وتم تقيمه ايضا بإستخدام ELISA الغير مباشره و كانت النتائج 1.715 و 1.575. و أظهر تفاعلات قويه مع كل منRIA واختبار Ouchterlony .